【飛諾美色譜】發(fā)酵產(chǎn)物純化解決方案

更新時間：2024-11-27

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近些年微生物技術(shù)發(fā)展迅猛，在發(fā)酵制藥生產(chǎn)中發(fā)揮的作用也越來越大，而且對全丨世界范圍內(nèi)的醫(yī)療事業(yè)和環(huán)境保護都有著積極意義，成為一種安全有效地生產(chǎn)價格低廉、純凈的生物制藥的新途徑。

發(fā)酵完成后，發(fā)酵產(chǎn)物存在于發(fā)酵液中，包括菌體細胞、蛋白、糖、水等，提取產(chǎn)物成了一項非常重要的任務(wù)，下面分享一下提取發(fā)酵液中產(chǎn)物的一點經(jīng)驗。

1樣品處理：

1. 發(fā)酵液調(diào)酸，析出大部分蛋白（產(chǎn)物不怕酸的前提下，也可其他方法除蛋白）

2. 離心，過濾，除掉大部分菌體細胞和蛋白

2樣品分析條件：

色譜柱：

Phenomenex Luna C18（2） 5μm 100? 4.6×150mm

流動相：A：水（0.1%TFA）

B：乙腈

流速：1mL/min

波長：215nm

3樣品制備條件：

儀器：

博納艾杰爾科技Cheetah 制備純化系統(tǒng)

色譜柱：Flash AQ C18 20-35μm 100? 80g 一支

流動相：A：水（0.1%TFA）

B：乙腈

流速：50mL/min

波長：215nm，235nm

上樣量：1.3L（3.73g）

總結(jié)

1.發(fā)酵液中成分復(fù)雜，容易污染制備色譜柱，因此，我們選擇Flash 大顆粒填料制備柱

2. 提前除去大部分蛋白，以免進樣后析出，堵塞柱篩板

3.發(fā)酵液為水樣，直接上樣會造成C18填料疏水塌陷，出現(xiàn)不保留，因此我們選擇AQ C18親水Flash柱，可純水相洗脫，直接泵抽上樣，只要目標產(chǎn)物有保留，上樣體積可達6倍柱體積以上

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